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M199基礎培養(yǎng)基的配制步驟

更新時間:2014-11-03      瀏覽次數:8544

M199基礎培養(yǎng)基是 Morgan 等在 1950 年zui早開發(fā)的一種化學成份明確的基礎培養(yǎng)基,zui早用于雞胚心細胞的培養(yǎng)。目前在補充了血清后可用于病毒及疫苗的生產,也用于多種非轉化的動物細胞生長。  

高壓滅菌型是該培養(yǎng)基的熱穩(wěn)定配方,可保證其營養(yǎng)成份在高壓高熱中不受影響。該配方中不含L-谷氨酰胺及碳酸氫鈉,需在高溫滅菌后添加。  

產品型號  

M199基礎培養(yǎng)基,含 L-谷氨酰胺,不含碳酸氫鈉  

M199基礎培養(yǎng)基,不含 L-谷氨酰胺,不含碳酸氫鈉  

M199基礎培養(yǎng)基,含 L-谷氨酰胺,含 HEPES,不含碳酸氫鈉  

M199基礎培養(yǎng)基,含 L-谷氨酰胺,含 HEPES,不含碳酸氫鈉,含 Hank 鹽  

M199 基礎培養(yǎng)基,含 L-谷氨酰胺,不含酚紅,不含碳酸氫鈉  

M199 基礎培養(yǎng)基,高壓滅菌型,不含 L-谷氨酰胺,不含碳酸氫鈉  

產品規(guī)格  

干粉(1L、10L 及 100L); 液體(500 ml)  配制方法  

干粉培養(yǎng)基的過濾配制  

  1. 將 1 升量的干粉在 950ml 細胞培養(yǎng)級純凈水中*溶解  
  2. 加入 2 克碳酸氫鈉,繼續(xù)攪拌至*溶解  
  3. 用 1N 鹽酸或氫氧化鈉調整到要求的 pH,將溶液定溶至 1000ml  
  4. 在超凈臺內用 0.22um 濾膜正壓過濾  
  5. 將培養(yǎng)基在 2~8℃避光保存  

高壓滅菌型的配制  

  1. 將 1 升量的高壓滅菌型干粉在 900ml 細胞培養(yǎng)級純凈水中*溶解  
  2. 將溶液 pH 調至 4.0,并將溶液定溶至 960ml  
  3. 在 121℃、15psi 高壓消毒 5 分鐘  
  4. 將培養(yǎng)基迅速取出,避免過久加熱引起成份分解或液體蒸發(fā)減少  
  5. 待培養(yǎng)基冷卻至室溫后,無菌操作加入 29.3ml 的無菌 7.5%碳酸氫鈉溶液,及 10ml 的無菌 200mM L-谷氨酰胺  
  6. 如有必要,用無菌的 1N 鹽酸或氫氧化鈉調整 pH  
  7. 將培養(yǎng)基在 2~8℃避光保存  

自備材料  

細胞培養(yǎng)級或注射級純水  

7.5%碳酸氫鈉溶液(無菌)  

200mM 谷氨酰胺溶液(無菌)  

1 N 鹽酸溶液(無菌)  

1 N 氫氧化鈉溶液(無菌)  

質檢指標  

形狀:淡黃色均勻粉末(干粉),澄清透明(液體)  

溶解:干粉按要求溶解后澄清透明  

pH 值:(加碳酸氫鈉前)4.4-5.0(加碳酸氫鈉后)(液體)7.4-8.0  

滲透壓:(加碳酸氫鈉前)230-270(加碳酸氫鈉后)(液體)280-  320  

菌落:每克小于 100cfu (干粉),無菌(液體)  

細胞生長:正常(干粉及液體)  

儲存及注意事項  

  1. 所有液體及干粉培養(yǎng)基應在 2~8℃避光保存,并在有效期內使用。  
  2. 不建議配制培養(yǎng)基濃縮液。部分氨基酸或鹽會在高濃度下不溶解或沉淀。 
  3. 液體培養(yǎng)基的 pH 儲存時會因為二氧化碳的逃逸而發(fā)生改變。建議盡量減少開瓶次數。  
  4. 滅菌后的液體培養(yǎng)基添加物應無菌,并在無菌操作下添加。  
  5. 干粉培養(yǎng)基吸濕性強,極易吸水變質。包裝打開后應全部使用或剩余舍棄。  

注意:本產品于研發(fā)生產使用

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